1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
接下來，細胞在新的培養(yǎng)環(huán)境中繼續(xù)生長，需要密切關注其狀態(tài)。每天定時觀察細胞形態(tài)、密度以及培養(yǎng)基的顏色變化，確保無細菌或霉菌污染。若培養(yǎng)基因細胞代謝而變黃，應及時更換新鮮培養(yǎng)基，以維持良好的生長環(huán)境。
在細胞培養(yǎng)過程中，溫度、濕度及CO?濃度的控制至關重要。通常，哺乳動物細胞培養(yǎng)在37℃、5% CO?及飽和濕度的條件下進行，這樣的條件能夠模擬體內環(huán)境，促進細胞增殖。定期檢查培養(yǎng)箱的性能參數，確保它們處于最佳狀態(tài)，是細胞培養(yǎng)成功的關鍵。
此外，細胞的健康狀態(tài)還需通過細胞活力檢測來評估。常用的方法包括臺盼藍染色法，通過染色區(qū)分活細胞與死細胞，從而計算出細胞活力百分比。保持高細胞活力對于后續(xù)實驗，如細胞轉染、細胞分化研究或藥物篩選等，都是至關重要的。
當細胞生長至適宜密度時，根據實驗需求，可進行凍存保藏或進一步實驗處理。細胞凍存時，需先配置含有適當比例血清和DMSO的凍存液，將細胞懸液與凍存液混合后，置于程序降溫盒中，逐步降溫至-80℃超低溫冰箱，最終轉移至液氮罐中長期保存。這一過程確保了細胞的長期存活和實驗的可重復性。
綜上所述，細胞處理是一個精細且需要耐心的工作，從復蘇到傳代再到后續(xù)的維護，每一步都需嚴格遵循操作規(guī)程，以確保細胞的健康生長和實驗的成功進行。